外泌体分离
01
Radiation-induced small extracellular vesicles as “carriages” promote tumor antigen release and trigger antitumor immunity
《像“车厢”一样的辐射诱导的细胞外小囊泡可促进肿瘤抗原释放并触发抗肿瘤免疫》
Theranostics 2020; 10(11): 4871-4884
摘要：该文证明了来源于放射肿瘤细胞的sEVs（细胞外小囊泡）可以通过增强CD8+和CD4+ T细胞的浸润而触发针对原发性肿瘤和实验性肺转移的抗肿瘤免疫。辐射也可能使sEVs富含肿瘤抗原和热休克蛋白。此外，从辐射诱导的sEVs中提取的含CUB结构域蛋白1（CDCP1）被鉴定为一种新的肿瘤相关抗原，并被开发为可能产生抗肿瘤免疫应答的多肽疫苗。
离心目的：细胞外小囊泡（sEVs）分离
离心条件：100,000 xg，2h
DOI
http://10.7150/thno.43539
02
Human trophoblast?derived exosomes attenuate doxorubicin?induced cardiac injury by regulating miR?200b and downstream Zeb1
《人滋养层细胞源性外泌体通过调节miR-200b和下游Zeb1减轻阿霉素诱导的心脏损伤》
J Nanobiotechnol (2020) 18:171
摘要：该研究用超速离心法从人滋养层细胞上清液中分离滋养层干细胞源性外泌体（TSC-Exos）。发现TSC-Exos和miR-200b抑制剂均能降低原代心肌细胞的增殖细胞凋亡。同样，接受TSC-Exos和AAV-miR-200b抑制剂的小鼠表现出心脏功能的改善，伴随着细胞凋亡和炎症的减少。生物信息学预测和荧光素酶报告结果证实Zeb1是miR-200b的下游靶点，具有抗凋亡作用。TSC-Exos通过抗凋亡和抗炎作用减轻阿霉素诱导的心脏损伤。其机制可能是通过抑制miR-200b的表达而增加Zeb1的表达。总之，此研究为TSC-Exos作为一种潜在的心力衰竭治疗工具的应用提供了新的思路。
离心目的：外泌体分离
离心条件：100,000 xg，1h
DOI
http://10.1186/s12951-020-00733-z
03
Integrative analysis of long extracellular RNAs reveals a detection panel of noncoding RNAs for liver cancer
《长链细胞外RNA的整合分析揭示了肝癌非编码RNA的诊断方法》
Theranostics 2021; 11(1): 181-193
摘要：文章使用多种癌症类型的79种血浆外泌体RNA-seq（exoRNA-seq）数据集，研究了不同的长exRNA种类在不同物种中的变异。整合了53个exoRNA-seq数据集和65个自我描述的无细胞RNA-seq（cfRNA-seq）数据集，以识别肝癌患者的复发变异。作者通过整合exoRNA-seq和cfRNA-seq数据集，鉴定了肝癌患者血浆中100多个复发变异。当使用机器学习模型将其中两个已验证的环状和结构化RNA（SNORD3B-1，circ-0080695）与miRNA（miR-122）组合在一起以对健康捐献者的肝癌患者进行分类时，交叉的平均AUROC 验证为89.4％。该研究表明，可以在血浆中检测到与癌症相关的不同类型的RNA变异，并确定了针对肝癌的3-RNA检测面板，尤其是对于AFP阴性和早期患者。
离心目的：外泌体分离
离心条件：110,000 xg，4h，4℃
DOI
http://10.7150/thno.48206
04
Extracellular vesicles containing ACE2 efficiently prevent infection by SARS-CoV-2 Spike protein-containing virus
《含有ACE2的细胞外囊泡可有效预防SARS-CoV-2 Spike蛋白病毒感染》
J Extracell Vesicles 2020; 10: e12050
摘要：SARS-CoV-2的进入细胞是通过刺突蛋白（S）与表面受体ACE2的结合介导，随后由宿主TMPRSS2引发，允许膜融合。在这里，我们生成了暴露于ACE2的细胞外囊泡（EVs），并证明ACE2-EVs是含有SARS-CoV-2S蛋白的慢病毒的有效诱饵。传染性的降低与ACE2的水平呈正相关，比可溶性ACE2的效率高得多，并且通过加入TMPRSS2进一步增强。
离心目的：无外泌体血清的制备
离心条件：100,000 xg，overnight（Type 45 Ti转头，Beckman Coulter）
DOI
http://10.0.3.234/jev2.12050
病毒/病毒样颗粒分离
01
Expression, Purification and Characterization of the Hepatitis E Virus Like-Particles in the Pichia pastoris
《戊型肝炎病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达、纯化及鉴定》
Front. Microbiol. 2020; 11:141.
摘要：戊型肝炎病毒（HEV）与急性肝炎有关。中国唯一获得许可的抗戊型肝炎疫苗是大肠杆菌纯化的重组病毒样颗粒（VLPs），包含病毒ORF2蛋白的368-660个氨基酸（aa）。病毒衣壳由ORF2蛋白形成，该蛋白含有三个糖基化位点。杆状病毒表达系统可被用来表达出糖基化的VLP， 包含112-608aa的ORF2蛋白。在这里，我们试图在毕赤酵母（P. pastoris）表达系统中产生含有112–608aa的ORF2蛋白的重组VLP。质谱分析证实了纯化蛋白的一致性。进一步的研究揭示了纯化蛋白的糖基化模式和VLP性质。用这些VLPs免疫BALB/c小鼠可诱导有效的免疫应答，表现为高ORF2特异性IgG滴度和以剂量依赖性方式增强脾细胞增殖。在毕赤酵母中产生的112–608aa或F2 VLPs似乎是开发戊型肝炎诊断和预防试剂的合适候选者。
离心目的：ORF2蛋白的纯化
离心条件： 10–40%不连续梯度碘克沙醇密度梯度离心，100,000xg，3h（SW 55 Ti转头，Beckman Coulter）
DOI
http://10.3389/fmicb.2020.00141
纳米颗粒分离
01
An OMV-Based Nanovaccine Confers Safety and Protection against Pathogenic Escherichia coli via Both Humoral and Predominantly Th1 Immune Responses in Poultry
《一种基于OMV的纳米疫苗通过体液免疫和以Th1为主的免疫应答在有致病性大肠杆菌感染时提供对家禽的安全保护》
Nanomaterials 2020, 10, 2293
摘要：禽致病性大肠杆菌（APEC）的菌外膜囊泡（OMVs）与纳米蛋白脂质因富含多种免疫原性分子而作为一种新型防止细菌感染的纳米疫苗受到了广泛的关注。在该研究中，采用超速离心法制备了APEC-O2衍生OMVs（APEC_OMVs）。电子显微镜和纳米颗粒追踪分析显示，APEC_OMVs具有膜封闭结构，平均直径89纳米。接种50g APEC_OMVs疫苗无副作用，并可保护小鸡免受同源感染。APEC_OMVs可由鸡巨噬细胞呈递并激活天然免疫反应。接种APEC_OMV疫苗后，血清非特异性免疫因子活性明显提高，特异性抗体反应免疫效果增强。
离心目的：APEC_OMVs囊泡的分离
离心条件：第一步：150,000xg, 2h, 4℃；第二步：20%、35%不连续梯度碘克沙醇密度梯度离心，180,000xg, 16h, 4℃
DOI
http://10.3390/nano10112293
分析型超速离心
01
Structurally symmetric near-infrared fluorophore IRDye78-protein complex enables multimodal cancer imaging. （结构对称的近红外荧光载体IRDye78-蛋白质复合物使多模式肿瘤成像成为可能）Theranostics 2021; 11(6):2534-2549.
Jiang Yang等人采用分析型超速离心技术（analytical ultracentrifugation, AUC）研究了目标蛋白α-乳蛋白（α-LA）在溶液中的聚集状态，以及各聚体分子的百分含量。最终证明IRDye78与蛋白质复合物可以帮助多模式肿瘤成像。
仪器型号：ProteomeLab XL-A 分析型超速离心机 (An-50 Ti rotor)
目的：基于沉降速率法对蛋白质聚集状态进行检测和表征
DOI
https://www.thno.org/v11p2534.htm
02
Characterizing Drug–Polymer Interactions in Aqueous Solution with Analytical Ultracentrifugation. （分析型超速离心表征药物-聚合物在水溶液中的相互作用）2021, 18, 1, 246–256
Kweku等人提出了使用分析型超速离心技术的沉降速率方法（sedimentation velocity）表征药物与聚合物的相互作用。研究了一种水溶性较差的药物KTZ和两种共聚物Soluplus、PAA在水溶液中的潜在相互作用。
药物?聚合物混合物的沉降谱。
仪器型号：Optima AUC分析型超速离心机 (An-60 Ti rotor)
目的：基于沉降速率法对小分子药物与聚合物的相互作用进行检测和表征
DOI
https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.0c00849