基于SPRI技术的AMPure XP纯化技术已经家喻户晓。该技术采用顺磁性的磁珠、选择性的结合特定大小的核酸，已广泛应用于NGS的纯化及片段筛选等领域。那么，如何做到精准、可重复的片段筛选呢？请看，NGS片段筛选宝典之：大片段去除秘技！

秘技1：选择合适的产品——SPRIselect！

家喻户晓的AMPure XP的设计功能是从PCR产物中纯化100bp以上的核酸片段。虽然已有大量试剂盒/论文提供了AMPure XP片段筛选的方法，但是贝克曼库尔特更推荐SPRIselect进行片段筛选，以获取精确结果。因为SPRIselect是针对精准片段筛选而优化的。

秘技2：采取合适的实验流程！

SPRI技术会优先将更大的片段结合在磁珠上。如果需要保留较小的片段，而去除更大的片段，那么在SPRIselect试剂与待筛选溶液混合后，通过磁力架保留上清、弃去磁珠。较大片段会留在磁珠上；上清中包含有所需的较小片段，可通过再次加入SPRIselect试剂（更大的终浓度）将其充分回收。具体流程如下图所示。

秘技3：使用正确的浓度！

SPRIselect的浓度（指反应的终浓度）越高，越有利于更小片段在磁珠上的结合。

如果想要去除溶液中的大片段核酸，可通过控制SPRIselect加入的量，来控制保留在磁珠上的片段大小。

如下图所示，

M = Marker

Shear = 1 μL of 20 ng/μL标准品水溶液

1.2x to 0.4x = 1 μL经不同浓度SPRIselect筛选后的标准品。该浓度指第一轮加入SPRIselect试剂的比例。第二轮SPRIselect试剂统一使用1.8X来充分回收上清中的小片段。

那么，加入的SPRIselect体积是如何计算？

第一轮（吸附大片段）和第二轮（吸附上清中的小片段）加入磁珠的算法有什么差异？

例如使用0.7x来去除50μL核酸里>600bp的片段，需要：

·  第一轮加入‘0.7x’的SPRIselect，即向样品中加入35μL的磁珠（50μL* 0.7 =35μL），共85μL。

·  第二轮加入‘1.8x’的磁珠至上一步的上清：所需SPRIselect的体积=最初的样品体积* (1.8x –第一轮磁珠比例)，即50μL* (1.8 – 0.7) = 55μL。

更具体的步骤，大家可参加说明书

关于SPRI技术的来龙去脉可点击视频了解

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