基于SPRI技术的AMPure XP纯化技术已经家喻户晓。该技术采用顺磁性的磁珠、选择性的结合特定大小的核酸，已广泛应用于NGS的纯化及片段筛选等领域。那么，如何做到精准、可重复的片段筛选呢？请看，NGS片段筛选宝典之：大片段和小片段双重去除秘技！

秘技1：选择合适的产品——SPRIselect！

家喻户晓的AMPure XP的设计功能是从PCR产物中纯化100bp以上的核酸片段。虽然已有大量试剂盒/论文提供了AMPure XP片段筛选的方法，但是贝克曼库尔特更推荐SPRIselect进行片段筛选，以获取精确结果。因为SPRIselect是针对精准片段筛选而优化的。

秘技2：采取合适的实验流程！

SPRI技术会优先将更大的片段结合在磁珠上，片段的选择是由SPRIselect溶液中的可溶组分的浓度来实现的。如果需要去除更大以及更小的片段、仅保留中间范围内的片段，该如何实现呢？很简单，只需要在SPRIselect试剂与待筛选溶液混合后，通过磁力架保留上清、弃去磁珠。较大片段会留在磁珠上（被丢弃）；保留的上清中包含相对较小片段。随后可通过再次加入SPRIselect试剂至该上清液，通过调整第二轮加入的SPRIselect浓度，可灵活可靠的将一定片段大小的核酸吸附到磁珠上，此时通过弃上清、乙醇漂洗、水溶液洗脱后就可以得到第二轮磁珠上所捕获的核酸溶液。此核酸就是经过了去大片段以及去小片段后的中间大小的核酸。具体流程如下图所示。

秘技3：使用正确的浓度！

SPRIselect的浓度（指反应的终浓度）越高，越有利于更小片段在磁珠上的结合。

第一次加入的SPRIselect是为了去除溶液中的大片段核酸。可通过控制SPRIselect加入的量，来控制保留在磁珠上的片段大小；浓度越大留在上清中的核酸片段越小。

第二次加入的SPRIselect是为了去除上清中的小片段核酸。由于本轮是向上一轮的上清中加入SPRIselect溶液，两轮SPRIselect中负责片段选择的组分叠加、浓度上升，使得磁珠能结合比上一轮更小一些的片段，

如下图所示，

M = Marker

Shear = 1 μL of 20 ng/μL标准品水溶液

xx-xx(代表“第二轮终浓度”-“第一轮浓度”)= 1 μL经不同浓度SPRIselect筛选后的标准品。

那么，加入的SPRIselect体积是如何计算？

第一轮（吸附大片段）和第二轮（吸附上清中的小片段）加入磁珠的算法有什么差异？

例如使用0.8-0.61x这样的浓度来选择50μL核酸里300-500bp的片段，需要：

·  第一轮加入‘0.61x’的SPRIselect，即向样品中加入30.5μL的磁珠（50μL* 0.61 =30.5μL），共80.5μL。

·  第二轮加入‘0.8x’的磁珠至上一步的上清：所需SPRIselect的体积=最初的样品体积* (0.8x –第一轮磁珠比例)，即50μL* (0.8 – 0.61) = 9.5μL。

更具体的步骤，大家可参加说明书

关于SPRI技术的来龙去脉可点击视频了解