贝克曼库尔特生命科学联合美国麻省理工学院和哈佛大学博德研究所和Luminous Bioanalytical Consulting公司开发了一套32色光谱流式细胞分析方案，用于B细胞亚群的深度免疫表型分析，涵盖活化、分化及功能的关键标志物。该方案同时整合了髓系细胞亚群标志物和慢性淋巴细胞白血病的相关标志物，可实现全面免疫图谱分析。
实验使用健康供体保存骨髓样本与冷冻保存外周血单个核细胞（PBMC）进行验证，证明其适用于临床样本的回顾性分析。该方案能从有限样本量中获取大量免疫学信息，对转化医学研究具有重要价值。方案使用CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块上实施验证——该模块作为CytoFLEX系列最新产品，专为高维光谱分析而设计，通过实验也展示了该产品在复杂多色实验中的出色表现。
实验方案
1.冷冻保存的外周血单个核细胞（PBMCs）在37℃水浴中快速解冻，转移至预热的清洗培养基。通过冲洗冻存管回收残留细胞，室温下400×g离心7分钟。细胞经两次清洗后，采用Cellaca系统联合AOPI染料计数，并调整至目标浓度。取百万级细胞分装至5 mL流式管准备染色。
2.活性染色使用1:500 PBS稀释液避光孵育15分钟，清洗后进行Fc受体封闭（1:200 STB缓冲液，4℃ 15分钟），随后实施单核细胞封闭（1:20 STB）。细胞首先在含Fc封闭试剂的BV缓冲液中与抗IgG抗体共孵育30分钟（室温）。染色后清洗三次，加入100 μL抗体混合液进行标记。最终细胞悬液经滤网过滤，重悬于300 μL STB缓冲液待检测。
3.单色对照管采用对照微球及1 μL单抗体制备，孵育20分钟后清洗，4℃保存。另取未染色细胞于65℃热灭活10分钟作为活性对照。每日质控及性能验证完成后，在连接CytoFLEX LX紫外激光流式细胞仪的mosaic 88检测模块上采集数据，实验模板及增益设置按需调整。
表1：抗体组合
实验结果
图1：荧光溢出扩散矩阵（Spillover Spreading Matrix, SSM）。该矩阵量化了因光谱重叠导致的各荧光染料信号向非主要检测通道扩散的程度
图2：设门逻辑
结 论
本研究基于CytoFLEX mosaic 88光谱检测模块，成功优化了32标志物B细胞检测方案，实现高维流式细胞分析。其设门策略可清晰区分B细胞亚群，整体方案支持稳健且精确的免疫表型分析，显著提升了光谱流式技术在B细胞研究中的应用能力。
“双擎驱动，洞见多维”——CytoFLEX mosaic凭借灵活的双栖双算法设计，结合便捷智能化软件操作，将助力全光谱流式分析突破传统边界，实现更高维度的单细胞精准解译。