Pooling是测序文库上机前的临门一脚。经过数小时乃至几天的实验，初始样品终于变成浓度、片段大小都符合质控指标的library嗷嗷待测。Pooling实验通常由两位操作者协作。根据表单信息将文库归一化到一定浓度，再将想要合并测序的文库混合，耗时耗力。

事实上Pooling完全可以不需要密集的吸液移液操作，不需要这么多时间和精力投入，甚至就不需要移液器和吸头。采用Echo声波移液系统，12分钟即可完成384个文库pooling1，而手工完成归一化和pooling需耗时长达3小时。

Echo通过聚焦声波能量转移低至2.5nL的样品，不需要吸头，无物理接触。每秒传输几百个液滴实现nL到uL级的液体传输。Echo可以微量化反应体系到几微升，甚至数百纳升，将样品从微孔板任意孔快速转移到目的板任意孔。在基因组学及合成生物学中，被应用到微量化NGS建库和快速pooling文库、引物、寡聚核苷酸探针当中。

Echo 一步法NGS文库Pooling

√ Echo不与文库样本直接接触，不需要费时间加载或清洗吸头，可以在不到一秒的时间将微孔板上的NGS文库转移到目标孔内。

√ 高浓度文库不需额外稀释。通过nL至uL级液滴转移，将浓度归一化和pooling简化为一步进行。

√ 数据管理和自动化操作可以避免人工操作失误，提高实验过程的可靠性。

Echo可关联输入文件，软件自动完成高通量pooling

Echo 一步法NGS文库Pooling。左：将需要pooling的各文库信息写入输入文件；右： Pooling运行示意

采用Echo比较384个文库的200 nL/文库等体积混样和等摩尔量混样。结果显示经Echo pooling后文库获得更加均一的测序量。

Echo 微量化NGS文库定量质控

Echo可完成384孔甚至1536孔每板的超高通量微量化文库质控定量。声波移液含DNA染料的缓冲溶液、文库到酶标板中进行荧光检测。或是进行文库qPCR检测体系构建，避免标准品梯度稀释的累积误差和气溶胶污染。文库定量的微量化能够减少试剂消耗，有效控制成本。此外，Echo支持在软件中以表单的形式挑选某些文库做qPCR。整个实验过程数据可循，避免手工操作的窜孔等错误。

采用Echo完成文库定量，微量化反应体系至2 uL，4 uL及8 uL绘制校准曲线

参考
1. LABCYTE?: Brochure | Echo Acoustic Liquid Handling for Genomics Research, Version 1.0 | AUGUST 2017