腺相关病毒(AAV)迅速成为基因治疗的首选方法,对这些疗法的严格表征在确保生产和患者安全方面至关重要。特别是对实心、空心及部分实心颗粒比例的量化审查尤为严格。AUC作为检测空壳率的金标准,提供远高于其他技术的数据分辨率。
高分辨率AAV分析的需求
AAV颗粒的遗传负荷具有可变性,只有含完整基因插入序列的颗粒才能实现预期功能。因此,纯化AAV颗粒时只分离出实心颗粒至关重要。对功能性(实心)及非功能性(空心/部分实心)颗粒比例的表征,是优化细胞培养效率、了解生产一致性、确定剂量及确保患者安全的关键。
AUC: 独特的表征技术
分析型超速离心机(AUC)采用独特的颗粒分离及表征方法。AUC分析后,颗粒通常按不同沉降系数(S)分离,沉降系数受颗粒大小、质量、形状和密度影响。由于AAV颗粒的质量和密度不同,其装载量也不同,而AUC擅长将这些颗粒进行分离并提供高分辨率数据,无需基质相互作用,也不会产生副作用。
AUC提供更高的分辨率
AUC已成为定量评价AAV颗粒质量及完整度的金标准。相比阴离子交换色谱(AEX),AUC具有更高分辨率,能够清晰鉴别颗粒。这些高分辨率的AUC分析结果不仅适用于最终产品质量控制,还能优化细胞培养方法,提高实心颗粒产出率。
Analysis of empty (E), full (F), and partially-full (P) AAV
particles with aggregates (X) via AEX (A) and AUC (B). Reproduced with
permission from Wang et al.?
采用 AEX(A)及 AUC(B)分析空心(E)、实心(F)和部分实心(P)AAV 颗粒及聚集体(X)。经 Wang 等人许可后转载。
小结
AUC在AAV检测中的应用,通过提供更高分辨率的数据,确保了基因治疗产品的纯度和有效性。AUC的高精度分析能力,对于生产过程的一致性和患者安全具有重要意义,是当前AAV颗粒分析的最佳选择。