密度梯度平衡AUC法(Density Gradient
Equilibrium,简称DGE-AUC)是一种利用离心技术实现颗粒分析的实验方法。其核心原理是将样品置于氯化铯密度梯度介质中,通过离心力作用氯化铯从而形成连续的密度梯度,具有不同浮力密度的颗粒在梯度中移动,最终达到与其密度相匹配的位置,形成一系列界面清晰的区带。在离心场中,悬浮于混合液中的颗粒与密度梯度介质存在密度差时,受到离心力的作用会沿着梯度沉降或者上浮,直至停留至与其自身密度相等的梯度介质密度处。密度差越大越容易分离,与颗粒的大小和形状无关,但大小和形状决定着到达平衡的速度、时间和区带的宽度。
在具体实验中,我们将待分离的样品与氯化铯混合或小心地置于密度梯度的顶部。样品可以是生物大分子、细胞或次细胞结构等,目标产物和杂质有密度差异。在离心力的作用下,样品中的颗粒根据其沉降系数以不同的速度向管底沉降。经过一定时间的离心后,颗粒逐渐在密度梯度中到达与其密度相等的位置即等密度点,此时颗粒不再移动,形成稳定的区带。密度梯度平衡法广泛应用于生物化学、分子生物学和医学领域,用于分析生物大分子、细胞和亚细胞结构、病毒载体、核酸、脂蛋白等。
利用DGE-AUC分析AAV空壳率结果示意