RNA提取过程中，在加入氯仿混匀静置3min后，需进行12000g，4℃，离心15min，离心后液体分层，RNA在上层水相中。

在此步骤离心中，需要全程保持低温，防止RNA降解。实验室所用的贝克曼高速冷冻离心机能满足这一条件，并且降温速度足够快，不需提前准备，非常方便。但需要注意一点，设置的离心时间包含了升降速时间，因此需要设置比所需时间长30s左右。

设备名称：微量高速冷冻离心机

设备型号：Microfuge20R

本图是由模式动物斑马鱼的野生型斑马鱼动物整体经过Beckman Optima XE-100离心机SW41Ti转子在40000 rpm下离心2.5h分离得到的核糖体图谱。

实验先采用重量比质量在密度梯度离心机上采用短帽，制作10-50％线性密度。使用1天的斑马鱼经过蛋白裂解液裂解冰上裂解10 min后12000rpm离心15 min，取上清加入制作好的梯度密度蔗糖上进行Beckman超速离心。对斑马鱼这类动物核糖体分离离心，需要特别注意样品的细胞量，以及样品是否需要匀浆过程，如有匀浆不可以太久，否则会破坏核糖体相互作用，影响结果。

这个实验感悟颇多；首先实验图谱呈现优美的幅度，且各个类型的核糖体分离均匀，层次清晰。结果中峰图下方的背景曲线平滑没有杂峰。既可以从中见证核糖体翻译的组装经历过程；核糖体中的多聚体分离逐步减少，像一座座小山，又像人生的阶梯一步步登上高峰。山水风光，见证美丽实验生活。

注：本图尚未发表，严禁投稿论文使用

使用Beckman超速离心机Optimal-100XPN，转头型号为SW 32 Ti：6 x 38.5 mL和SW 41 Ti  6 x 13.2mL 提取外泌体，先用SW 32 Ti100000g离心70min，弃去上清，PBS重悬并收集多个离心管中液体转入SW 41Ti再次100000g离心70min，离心管底部淡黄色沉淀为外泌体。超速离心机在操作时一定要注意配平，带上转头称量配平，精确到小数点后3位。

从研究生开始做实验到现在使用Optima L-100XP已经有5年了，设备虽然购置早，但性能相对稳定。我做的是囊泡研究，需要使用该仪器将细胞上清进行超速离心。首先需要将细胞上清进行300-10000 g的梯度离心以去除活细胞、死细胞及细胞碎片。然后转入贝克曼超速离心管中，在Optima L-100XP中以100000 g离心至少70 min，得到的沉淀再用PBS重悬，重新以100000 g离心至少70 min，则所获沉淀即为所需。这里的问题是无论是定角离心还是水平离心，由于囊泡是纳米颗粒，在二次超速离心后得到的沉淀均肉眼不可见，因此对沉淀的位置和范围的准确判断至关重要，特别是针对定角离心，否则囊泡的得率将变得非常低。分享的图片是荧光染料标记的囊泡在超速离心后的离心管底图片，有助于判断沉淀的位置。

植物体内DRMs粗提方法

取~0.5g植物幼苗（正常生长7 d），在液氮中研磨至粉末，加入1.5 ml NEBT于粉末中，于冰上缓慢解冻，转移至离心管中，冰上放置30-60 min。

在38 mL的聚碳酸酯超速离心管(贝克曼库尔特，SW32Ti转子)中，加入配制的60 %的蔗糖溶液2 mL至离心管管底，在其上方依次铺上2 mL的浓度为55%，50%，45%，40%，35%，30%，25%，20%，15%，10%的蔗糖溶液，注意加入时不要晃动离心管，避免不同浓度的蔗糖分层不明显。冰上放置，待用。

将提取完成后的样品4 °C，16000 g，离心10 min，取上清液约2 mL，置于离心管中22 mL连续蔗糖梯度（10 - 60%）最上层，用万分之一天平对离心管进行配平，质量差值不能大于0.001。然后将离心管放入贝克曼SW32Ti转子中，设置参数为4℃，32000 rpm（约180000 g）离心18小时。DRMs大致位于35%浓度蔗糖处。

我们实验室用的是贝克曼立式高速冷冻离心机，型号是Avanti J-26xp。每次使用离心机之前，我都会提前将离心机的温度和转速设置好进行预冷，一般都是离心菌体和发酵液，分离的效果很好，分离的上清液去做高效液相色谱进行检测分析也很干净，检测不到菌体之类的杂质。我觉得这种离心机的优点是容量很大，离心的效果好，需要的时间短，离心的温度可以调节，而且温度和转速也都实时地显示出来了，转子的数量也可以自己选择，也很安全，不用担心散热的问题。

图为合成的NIR二区荧光染色剂BBT及商业染色剂DiR对外泌体的染色效果对比。

使用落地式XPN-100离心机，sw55转头，5ml离心管。在4摄氏度下，12万g（RCF）离心70分钟，去上清，重复两次。

实验中，先用荧光染色剂对已完成提取的4T1细胞外泌体于PBS体系中过夜染色，染色结束后使用PBS将样品稀释至4.5ml左右，离心70分钟后倒去上清，再次使用PBS稀释样品，重复离心步骤，即可达到洗去游离的荧光染色剂的目的。

该步骤中使用的转速和时间与提取外泌体最后一步骤相同，确保外泌体能沉于离心管底部，如图，可以看出染色后的外泌体清晰可见。同时实验也设有对照组，验证了游离的荧光染色剂不会在该转速沉淀。

染色后的外泌体可以用于流式细胞仪、荧光成像、体内成像。

使用离心机需要注意严格配平等问题，在离心机升速过程中要注意调整转速。

在我们提取大肠杆菌核糖体过程中，要经过反复的超速离心。使用的离心机机型是Optima XPN-100 Ultra，整套实验流程下来，大约需要一周时间，其中离心约60小时，主要使用Type 45Ti和SW32 Ti两种离心转子，包括sucrose cushion pellet，sucurose gradient等。每次核糖体纯化出来，都能感觉自己快累得散架，但为了课题、为了科研也得加油呀。

早些时候听着仪器加速、减速的声音，心也不自觉地跟着紧张得要命，就怕转子突然飞出来。还梦见过夜离心时离心管破裂，离心机故障，吓得都没睡好。五年过去，和超速离心机也算是老伙伴了，操作熟练，也不再胆战心惊。每次看到纯化出来漂亮的核糖体图片，不论是蛋白胶图还是负染图片，还是很满足开心哒。

①    利用beckman台式超速离心机Optima MAX-XP，搭配MLA-50转头，361625超离管，120,000×g，65min后得到细胞外囊泡，用2mL PBS重悬后，装载在Beckman超离管底部。上方依次缓慢加入36%、26%、14%和6%w/v的碘克沙醇溶液；

②    利用beckman超速离心机L-100XP，搭配SW32 Ti转头，355631超离管，150,000×g，4h，升3降5，得到八个组分，从上到下依次收集这些组分，分别用1mL PBS重悬；

③    利用beckman台式超速离心机Optima MAX-XP，搭配MLA-50转头，361625超离管，120,000×g，65min后得到沉淀，分别重悬于50μL PBS中。

④    利用NTA检测不同组分中样本浓度和粒径，利用TEM检测不同组分中样本形态；

实验结果表明：

①    F2，F3，F4中存在非常纯的细胞外囊泡，呈茶托状结果，同时F3中细胞外囊泡数量最多，F2与F4中相差无几；

②    F1，F7，F8中几乎没有细胞外囊泡，F5和F6存在细胞外囊泡，但同时存在很多污染物；

我们实验室使用的是贝克曼台式低温离心机。配制不用密度的蔗糖溶液，按由高到低的顺序加之离心管，可看到明显的分层，最后将样本加到最上层，100,000g离心8小时，提取不同密度的中间层，100,000g离心1小时，即可获得目的大小的小纳米分子。

速度和多功能性优势一起融合入紧凑小巧的小型冷冻离心机设备。快速，低温运行且功能齐全的Microfuge 20小型台式冷冻离心机经过精心设计，可以满足实验室各种应用需求，包括：

1、制冷型离心机

2、核酸和蛋白制备

3、制粒，萃取

4、纯化

5、浓缩

6、相分离和受体结合

7、蛋白质沉降、颗粒和细胞碎片快速沉淀

贝克曼台式冷冻离心机，将减速快、噪音低、控温稳定，设备质量性价比高，原厂在国内各大城市均有常驻服务工程师，响应快，售后服务好，是不二选择。

我们实验室一般使用贝克曼低温超速离心机离心脂质体。脂质体经过薄膜分散法制备后，使用PH=7.4的PBS水化至脂质体终浓度为2mg/mL。水化后经超声可获得空白脂质体，或者在此步骤中添加需要包裹的药物，即可获得载药脂质体。待样品制备完成后，根据实验计划选择合适的转子和超速离心管，我一般使用100ti的转子，5mL的超速离心管。本实验脂质体离心设置的程序为30000rpm，4℃离心2h，升速设为max ，降速设为4。在这个条件下是可以将脂质体离心到离心管的底部，最后检测脂质体的包封率。

1.取新鲜动物组织0.1～0.2g置于组织匀浆器中，加入预冷的Trizol液1ml于匀浆器中，在冰浴中迅速匀浆15～30s，以充分研碎组织。然后将细胞悬浮液吸入另一1.5ml管中，于室温下静置5min。

2.加入200 μl氯仿，剧烈振摇15s混匀后，室温静置3min。

3. 4℃，12 000r/min离心15min，RNA分布于水相中。

4.将上层无色水相转移到另一管中，加入500 μl异丙醇，室温静置10min。

5. 4 ℃，12 000r/min离心10min。

6.弃上清液，用1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀物，4 ℃，12000r/min离心5min。

7.弃上清液，室温干燥15min.

8.向干燥过的沉淀物中加入200μl DEPC水溶解沉淀物，于-20 ℃保存备用。